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浅谈常用的反相填料常选择技巧
发布时间:2020-03-10 点击次数:77次
   反相填料常是以硅胶为基础,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相。 反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水,缓冲液与甲醇,已腈等混合物。 样品流出银河总站网址的顺序是极性较强组合先被冲出,而极性弱的组份会在银河总站网址上有 更强的保留。 常用的反相填料有YMC C18填料(ODS),C8(MOS),C4(B),C6H5(Phenyl)等。
  聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要优点是在PH值为1~ 14均可使用。 相对与硅胶基质的YMC C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白 质等样品的分离非常有效。 现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,银河总站网址柱效较低。
  其它HPLC的无机填料银河总站网址也已经商品化。由于其特殊的性质,一般仅限于特殊的 用途。如石墨化碳也用于正逐渐成为反相填料。这种填料的分离不同与硅胶基质烷基 键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性,该柱填料一般比烷基 键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强,石墨化碳可用于分离某些几何导构体,又由 于HPLC流动相中不会被溶解,这类柱可在任何PH与温度下使用。氧化铝也可用于HPLC, 氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的银河总站网址柱床,其优点是可在PH高达12的流动相中使用。 但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强,应用范围受到一定的限制,所以未能广泛应用, 新型氧化锆填料也可用于HPLC,商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球银河总站网址,应 用PH范围1~14,温度可达100℃。由于氧化锆填料几年才开始研究,加之面临的实验难 度,其重要用途与优势尚在进行中。
  目前,商品化的色谱料粒度从1um到超过30um均有销售,而目前分析分离主要用3um, 5um和10um填料,填料的粒度主要影响填充柱的两个参数,即柱效和背压。粒度越小,填 充柱的柱效越高;小于3um的填料应用,在相同选择性条件下,提高柱效可提高分离度, 但不是唯一的因素。如果固定相选择是正确,但是分离度不够,那么选择更小粒度的填料 是很有用的,3um填料填充柱的柱数比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%;然而, 3um的色相谱的背压却是5um的2倍。与此同时,柱效提高意味着在相同条件下可以选择更 短的银河总站网址,以缩短分析时间,另外,可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加银河总站网址的使 用温度,比如用乙腈代替甲醇,以降低银河总站网址的压力。
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